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本试剂盒基于相对定量qPCR来直接比较样本的平均端粒长度，即采用端粒重复序列(Tel)的拷贝数与基因组单拷贝基因(SCR)的拷贝数比值(T/S)作为端粒相对长度。单拷贝基因引物(SCR)特异性识别并扩增人类11号染色体上78bp长的区域。

端粒(Telomere)是由多个重复核苷酸元件(TTAGGG)所串联组成的一段真核细胞染色体末端的DNA序列，除了提供非转录DNA的缓冲物外，还能保护染色体末端免于融合和退化，保护染色体结构稳定和遗传完整。端粒是一个人老化速度的最重要和准确的指标，它的初始长度由遗传和环境因素决定，并且会随着时间的推移而减少。有研究表明，端粒长度与DNA修复、衰老、细胞凋亡及肿瘤发生等有密切的联系，因此，对于研究人员来说，准确而可重复地测量端粒长度尤为重要。

• 即开即用，快速获得结果，可节省多达50%的时间。
  
• 优化的即用型预混液用于快速PCR反应，且预混液中的SYBR Green I染料可分析多个目标核酸，无需合成序列特异性探针。
  
• 高效可靠的定量，准确检测各种起始量的模板，扩增稳定、定量结果具有高度重复性。
  
• 无非特异性扩增。每组引物均已经过扩增曲线效率验证(E＞98%，R2＞0.99)，熔解曲线分析以及凝胶电泳验证。
  
• 使用PCR扩增，几乎每个分子生物学实验都有相关设备，非常方便。
  
• 抗体法热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增，同时优化了PCR配方，适合低浓度模板的扩增，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的标准曲线。
  
• 本制品足够100次/50样(一次重复)的染料法荧光定量PCR反应。
  
• 本制品只能用于科研。

• 本制品中含有荧光染料SYBR Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射，使用前请务必颠倒混匀。
  
• 为了您的安全及健康，实验操作时请穿实验服并佩戴一次性操作手套。

• 配制PCR反应体系：推荐使用20μL体系以保证目的基因扩增的有效性和重复性。若要进行多个反应，可制备通用组分的预混液，在每管或每孔中加入合适的体积，然后加入特殊的反应组分(例如：模版)
  

  成分	用量	终浓度
  2×SYBR qPCR MasterMix	10μL	1×
  引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
  基因组DNA	0.5～5ng	-
  50×ROX	根据仪器选择添加量或不添加	-
  Nuclease-free ddH2O	至20μL	-
  盖上或密封反应管/PCR板，轻轻混匀。可以稍微离心，确保所有组分都在管底。

  • 可根据选择的仪器在反应体系中加入ROX染料，将反应体系中的荧光信号标准化，ROX用量参考下表：
    

    PCR仪器	20μL体系ROX用量
    ABI7300、7900HT、StepOne等	2μL
    ABI7500、7500Fast、ViiA7、Stratagene Mx3000、Mx3005P以及Mx4000等	0.4μL
    Roche仪器、Bio-Rad仪器，Eppendorf仪器等	无需添加

• 设置PCR反应程序：将反应体系置于荧光定量PCR仪中，按下表所示反应程序设置您的PCR仪。
  

  过程	温度	时间
  预变性	95℃	3min
  PCR反应 (35～40个循环)	95℃	5sec
  	58℃	30sec
  	72℃	30sec
  熔解曲线		按qPCR仪器手册执行

  • 最适温度和孵育时间可视具体情形而定。
    
  • 决定最佳退火温度的主要因素为引物长度及引物碱基组成。根据试剂盒端粒及SCR引物组的特性，我们建议退火温度设置为58℃。

• 定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。
  
• 荧光定量PCR检测之后得到基因组单拷贝基因(SCR)和用端粒重复序列(Tel)的Ct值，ΔCt＝Tel - SCR，使用ΔCt法计算Tel与SCR的相对拷贝数T/S比率(T/S ration)，由于T/S比率同端粒长度成正比关系，因此可以通过T/S比率来反应端粒的相对长度。
  
  T/S ration＝2^-ΔCt
  
  
  • 例如Tel平均值为30.45，SCR平均值为23.51，代入公式则T/S ration＝0.00814。